產品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產品僅用于科研標準規(guī)格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

標本要求：

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時；更長時間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實驗前準備：

ELISA進口試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

（4）細胞培養(yǎng)上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

（5）培養(yǎng)細胞

檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

Phospho-ATP1A1 (Ser16)    磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體

Acetyl CoA Carboxylase    乙酰羧化酶抗體

Phospho-Acetyl Coenzyme A carboxylase alpha (Ser78)    磷酸化乙酰羧化酶抗體

Phospho-Ack1 (Tyr859 + 860)    磷酸化Ack1抗體

phospho-AMPK alpha-1(Ser485+Ser491)    磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體

phospho-AMPK beta 1 (Ser108)    磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體

phospho-ALK (Tyr1604)    磷酸化間變型淋巴瘤激酶抗體

phospho-ATM(Ser1981)    磷酸化毛細血管擴張性共濟失調癥突變蛋白抗體

phospho-ATP citrate lyase (Ser455)    磷酸化三磷酸腺檸檬酸裂解酶抗體

phospho-ATR (Ser428)    磷酸化ATR抗體

AMN1    細胞核重定位及紡錘體檢查點蛋白AMN1抗體

ALG11    天連接糖基化11抗體

ASF1A    細胞衰老相關蛋白ASF1A抗體

AGPHD1    氨基糖苷類磷酸結構域蛋白抗體

ASGPR1    唾液酸糖蛋白受體1抗體

ARSF    芳香基硫酸酯酶F抗體    NE-B重酒石酸ISA試劑盒    NE-B ELISA Kit    48T/96T

TAF腫瘤血管生長因子ELISA試劑盒    TAF ELISA Kit    48T/96T

TAA腫瘤相關抗原ELISA試劑盒    TAA ELISA Kit    48T/96T

TSTA腫瘤特異性移植抗原ELISA試劑盒    TSTA ELISA Kit    48T/96T

TSGF腫瘤特異性生長因子ELISA試劑盒    TSGF ELISA Kit    48T/96T

TSA腫瘤特異性抗原ELISA試劑盒    TSA ELISA Kit    48T/96T

TGSF腫瘤特異生長因子/腫瘤相關因子ELISA試劑盒    TGSF ELISA Kit    48T/96T

TNFAIP6腫瘤壞死因子誘導基因6蛋白ELISA試劑盒    TNFAIP6 ELISA Kit    48T/96T

TWEAK腫瘤壞死因子相關弱凋亡誘導因子ELISA試劑盒    TWEAK ELISA Kit    48T/96T

TRANCE腫瘤壞死因子相關激活誘導因子ELISA試劑盒    TRANCE ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R3腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體受體3ELISA試劑盒    TRAIL-R3 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R2/DR5腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體受體2ELISA試劑盒    TRAIL-R2 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R4腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體4ELISA試劑盒    TRAIL-R4 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R3腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體3ELISA試劑盒    TRAIL-R3 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R1腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體1ELISA試劑盒    TRAIL-R1 ELISA Kit    48T/96T

TRAF6腫瘤壞死因子受體相關因子6ELISA試劑盒    TRAF6 ELISA kit    48T/96T

TRAF1腫瘤壞死因子受體相關因子1ELISA試劑盒    TRAF1 ELISA kit    48T/96T

TNFRSF18腫瘤壞死因子受體超家族成員18ELISA試劑盒    TNFRSF18 ELISA KIT    48T/96T

TNFsR-Ⅱ腫瘤壞死因子可溶性受體ⅡELISA試劑盒    TNFsR-Ⅱ ELISA Kit     48T/96T

TNFsR-Ⅰ腫瘤壞死因子可溶性受體ⅠELISA試劑盒    TNFsR-ⅠELISA Kit     48T/96T

TL1A/TNFSF15腫瘤壞死因子超家族15ELISA試劑盒    TL1A/TNFSF15 ELISA Kit    48T/96T

TBA總膽汁酸ELISA試劑盒腫瘤壞死因子γELISA試劑盒    TNFγ ELISA Kit    48T/96T

TNFβ腫瘤壞死因子βELISA試劑盒    TNFβ ELISA Kit    48T/96T

TACE腫瘤壞死因子α轉化酶ELISA試劑盒    TACE ELISA Kit    48T/96T

操作步驟：

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。