組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
Sodium Danshensu伏草隆 分析標準品磷鉬酸銨 AR,96.5%

Puerarin氯甲酸異酯  97%三乙基芐基氯化銨 98%

Saikosaponin A異隆 分析標準品，99.5%磷鉬酸 AR

Saikosaponin B1利谷隆 分析標準品聚烯酸鈉 average Mw 500萬-700萬 ,80目

Saikosaponin C氯甲 98%（）聚烯酸鈉 average Mw 400萬-500萬

Saikosaponin D綠谷隆 分析標準品四丁基溴化銨 AR,99.0%

Baicalin氯甲酸正酯 99%4-乙酰氧基苯甲酸  99%

Baicalein氯甲酸苯酯 98%4-基苯甲酸 98%

Scutellarin甲基托布津 分析標準品檸酸 97%(T)

Wogoside正  ACS, ≥99.5%4-乙 98%

Alkaline transfer solution2,4-二氯苯胺 99%L-(-)樟腦磺酸 99%

1-Ami-2-naphthol-4-sulfonic acid(S)-4-芐基-2-惡唑烷酮  99%D(+)樟腦磺酸  99%

Ammonium bitartrate(R)-4-芐基-2-惡唑烷酮   99%（±）-樟腦-10-磺酸 99%

Amygdalin乙酰氨基二酸二乙酯  98%甲基烯酸烯酯, 包含50-185 ppm MEHQ穩(wěn)定劑, 98%

Phenylhydrazine hydrochloride對羥基苯酮  98%甲基烯酸芐基酯 98%

Azomethine-H mosodium salt hydrate(S)-4-異基-2-惡唑烷酮 98%二甲基烯酸1,3-丁二酯, 含200 ppm MEHQ穩(wěn)定劑, 95%

十二烷基硫酸鈉(分子生物學(xué)級)Toll-like Receptor 4 (D8L5W) Rabbit mAb (Mouse Specific)PIRH2  泛素連接酶抗體

聚乙二6000TrkA Blocking PeptidePinin  橋粒相關(guān)蛋白DRS抗體

吐溫20MED12 (D9K5J) Rabbit mAbPin1  肽基脯氨酞順反異構(gòu)酶Pinl抗體

5-溴-4-氯-3-吲哚基-beta-D-葡糖苷酸環(huán)己胺鹽(X-GLUC)IGF-II Receptor/CI-M6PR (D3V8C) Rabbit mAbPIM3  絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶PIM3抗體

曲拉通X-100Rab38 (D2V9Z) Rabbit mAbPIM1  絲氨酸/蘇氨酸激酶蛋白Pim1抗體

胰蛋白胨COMT (D4N6M) Rabbit mAbPILR beta  細胞表面受體PILRβ抗體

生物素;D-生物素;維生素 H 輔酶 ROLFM4 (D1E4M) XP® Rabbit mAbPILR beta  細胞表面受體PILRβ抗體

甘油OLFM4 (D1E4M) XP® Rabbit mAbPIK3CA  磷脂酰肌激酶催化亞單位A抗體

檸檬酸鈉二；檸檬酸三鈉二Phospho-CDK Substrate [pTPXK] (D9V5N) Rabbit mAbPIK3C3/PI3 kinase type 3  磷脂酰肌激酶3催化亞單位3抗體

酸KPNA2 AntibodyPIH1D1/P17  核仁同源蛋白17抗體
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